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那些年,我们一起追过的WB实验
点击次数:2284 发布时间:2015-07-06


那些年,我们一起追过的WB实验,总是因为环节多、耗时长让实验室的达人们头疼不已。虽然天天做Western blot,但不是忙上一天zui后看不清条带,就是条带清晰了样品间差异很难重复。今天就让我们来看看如何追到WB实验这位高冷范儿的沈佳宜。


Westernblot的困惑

  • Westernblot环节多、耗时长,即便是同一样品跑同一块胶,zui终条带间灰度差异也高达10%。虽然天天做Western blot,但不是忙上一天zui后看不清条带,就是条带清晰了样品间差异很难重复。
  • 不知道曝光多久zui好?不知道显影多久合适?定量结果不确定?结果无法重现?


哥家AWB真身


苹果彩票注册    GE的Amersham WB system (AWB)集成了的Western blot实验流程,从电泳、转印、印迹到zui终成像分析功能,让以往手工作坊式的WB自动化、快速化和标准化,大大减少实验中的差异,带来一致的、定量的蛋白质分析结果。这台完全一体化的系统由哥家位于瑞典乌普萨拉的蛋白科学中心实验室研发,于2014年底上市后便已助力了CancerCell文献。

    AWB由主机、软件和专属耗材组成。主机包括两部分:电泳与成像单元和印迹与孵育单元。

    AWB系统可以保证Westernblot实验在4小时之内完成,而无需一整天的漫长等待。


AWB重新定义实验步骤

    *步:电泳 

苹果彩票注册    在这一步中,我们使用恒定温度、高度均一的电流装置,配合质量稳定的高分辨率预制胶和无液体的缓冲液条,将时间由2小时节省到42分钟,也让电泳步骤的波动降到zui低。电泳一旦到达检测前沿,电泳自动停止并成像评估。


    第二步:转印 

    从制作三明治,到蛋白质从凝胶转移到膜上,所有关键的参数和组件都经过标准化,有利于带来zui佳的结果和zui低的背景。AWB PVDF卡设计巧妙,可避免用户误操作,而滤纸也已经切好,配合转印架的设计,减少出错的可能。在关闭转印架时,内置的滚筒可以去除气泡,增加重现性。内置的冷却也能保持恒定的温度,避免过热。


    第三步:孵育 

    大家都知道,抗体孵育这一步是多么的琐碎和烦心,守在小摇床边等待与换液,消耗了大量的时间。AWB可以做我们的换液机器人,设置好程序即可放心走开,而孵育的程序总是可控,不用担心人工情况下这次孵育时间长了信号强那次洗涤液加少了背景高。  


    第4步:检测和成像 

    低荧光背景的PVDF卡,经过优化的荧光标记试剂,以及高性能的激光扫描仪,这些带来了高质量的定量数据。因此,我们可以灵敏检测蛋白丰度的微小变化,分离和比较磷酸化与非磷酸化蛋白,并在同一块印迹上准确测定高丰度和低丰度蛋白。


    第5步:分析

    对于数据分析而言,软件的方便好用至关重要。扫描一结束,AWB软件自动开展数据分析,通过柱状图、泳道图和表格显示关键信息。它能显示所选择泳道和条带检测结果,定量目标蛋白相对杂质的百分比,并利用总蛋白或内参蛋白来归一化目标蛋白的信号,满足科学界对WB结果越来越重视的定量化要求。


AWB的独特之处

    标准化

苹果彩票注册    预制胶的使用避免了的凝胶质量的不稳定,实验的参数化和程序化避免了人为因素的不稳定,以总蛋白作内参结合荧光技术避免了结果分析的不稳定。


    快速化

    我们仅花了4小时便完成了WB实验,提高了实验室的工作效率和竞争力。


    自动化

    我们只需要做少量的准备工作便可做甩手掌柜,让手机上的Watch app来提醒。


从此,我们不再担心Westernblot的结果像抽奖了。通过这台智能的仪器、专属的耗材和精心优化的实验方案,可以获得更加定量、更容易重现的Westernblot数据。这样,就能少一些重复,少一些优化,也少一些troubleshooting。帮助实验达人们追到WB实验这位高冷范儿的沈佳宜。

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