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Millipore超滤离心管的选择、应用及使用方法
点击次数:12278 发布时间:2015-11-13

Amicon? Ultra离心超滤管

? 高回收率 Ultracel 再生纤维素膜具有一系列截留分子量

? 高回收率> 90%

? 垂直结构的膜减少了浓差极化,加快离心速度,快达 5 分钟

? 热密封膜将下游溶出物污染可能性降到zui低

? 100% 完整性检测确保性能可靠

? 透明外壳和体积刻度方便样品察看

? 直接吸取样品减少处理步骤

? 高浓缩倍数:80–100 


应用:

 ? 生物样品浓缩:包括抗原、抗体、酶、核酸或微生物

 ? 组织培养提取物或细胞裂解液中大分子组分的纯化

 ? 对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩

 ? 脱盐和缓冲液更换

典型蛋白质回收:

产品信息:

改进了垂直膜的设计,Amicon Ultra-0.5系列性能更好,离心时间更短

货号

产品

NMWL,kDa

包装数量

UFC500396超滤管[0.5ml 3KD]396
UFC501096超滤管[0.5ml 10KD]1096
UFC503096超滤管[0.5ml 30KD]3096
UFC505096超滤管[0.5ml 50KD]5096
UFC510096超滤管[0.5ml 100KD]10096

Amicon Ultra-4系列,用于浓缩物体积 1–4mL 的装置

货号

产品

NMWL,kDa

包装数量

UFC800396超滤管[4ml 3KD]396
UFC801096超滤管[4ml 10KD]1096
UFC803096超滤管[4ml 30KD]3096
UFC805096超滤管[4ml 50KD]5096
UFC810096超滤管[4ml 100KD]10096

Amicon Ultra-4 超滤管超滤管使用离心管和盖装配。

Amicon Ultra-15系列,用于浓缩物体积 <15 mL

货号

产品

NMWL,kDa

包装数量

UFC900396超滤管[15ml 3KD]396
UFC901096超滤管[15ml 10KD]1096
UFC903096超滤管[15ml 30KD]3096
UFC905096超滤管[15ml 50KD]5096
UFC910096超滤管[15ml 100KD]10096

Amicon Ultra-15 超滤管超滤管使用离心管和盖装配

超滤管使用方法和注意事项
      蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号 的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用,使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方法和注意事项。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,zui常见的是Ultra-15(10kD)。到底选择多大截留分子量比较合适呢?10kDa、 5kDa、还是30kDa?通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤 管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速 rpm换算成g之后,有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至zui低档,减小对膜的压力。注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开离心机,否则离心机出问题时,无法*时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为 止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再 浓缩至1ml左右,连续三次,zui后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍 左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出zui终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的zui后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。zui后加入MilliQ水到超滤管中,没过 超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将 管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用 MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。

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