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Whatman DEAE纤维素填料 DE-52 2kg

产品名称:Whatman DEAE纤维素填料 DE-52 2kg

产品型号:14022169

产品报价:9999

产品特点:DE弱(带电量依赖于pH值)阴离子交换剂,基于二乙胺乙基(DEAE)的叔胺功能基团。QA52是强(带电量不依赖于pH值)阴离子交换介质,包含有季胺基团。世界上使用Z广泛的DEAE纤维素,用于带有低至高负电荷的生物聚合物,高流速,高分辨率.“Whatman DEAE纤维素填料 DE-52 2kg "

14022169Whatman DEAE纤维素填料 DE-52 2kg的详细资料:

纤维素DE-52英文名:DEAE Cellulose DE-52
性质及用途:预溶胀微粒, 为中等碱性阴离子交换剂,柱层析用于吸附剂,用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清组分和病毒等各种生物高分子。
性状:干燥细结晶或纤维状
基质 高度交联纤维素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附载量 180mg HSA/ml
填料的颗粒大小 50μm
zui大流速 300cm/h
pH范围 3-10,在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性 各种缓冲液及盐,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M盐酸胍,乙醇,异丙醇等
物理稳定性 0.1M中性缓冲液中,120℃30min
保存温度 +4--30℃
纤维素DE-52提取法纯化多克隆抗体
该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
1.批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE52)50g,置于1000ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤,收集湿纤维素,以降低其离子强度。按1ml血清加湿重5g DE52,经过充分搅拌,置4℃吸附1h。上清液可再如此处理一次,即获得较纯的IgG。该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。
2.Tris-Cl离子交换层析法(Ion-exchange chromatography)
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB;0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。
(3)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(4)1.5×50cm 层析柱;透析袋;紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。
【操作步骤】
(1)DE52纤维素的处理:DE52经酸、碱处理,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡。
(2)装柱:将层析柱固定于滴定架上,柱底垫一圆形尼龙纱,出口接一细塑料管并关闭出水。将浸泡于0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,待DE52自然沉降3~5cm高时,吸除0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl,或松开出水口螺旋夹,控制流速1~2ml/min,同时连续加入DE52至所需高度。待DE52完全沉降后,柱面放一圆形滤纸片。
(3)平衡:松开出水口螺旋夹,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡,控制流速为15滴/min,待流出液与洗脱液之pH值达到一致时,停止平衡。
(4)待提取样品的准备:将蛋白装入透析袋里,置4℃冰箱,对0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析过夜。
(5)加样、洗脱与收集:用吸管吸去柱面液体,以毛细吸管沿柱壁加入样品,样品体积相当于柱床体积的1%~2%,蛋白浓度为50~70mg。启开出水口螺旋夹使样品缓慢进入柱床内,并用少量洗脱液清洗柱壁;待液体进入柱床后,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl洗脱,控制流速为14~16滴/min。分部收集器收集,紫外监测,或人工收集,以紫外分光光度计分别测定每管280nm OD值,描绘洗脱液峰。
(6)浓缩:将洗脱液的280nm OD上峰段与下峰段各管分别合并,装入透析袋,以PEG浓缩至所需体积。
3.Tris-PO4离子交换层析法
该法在上述方法的基础上稍加改良,即通过梯度洗脱,可用于血清中IgG和IgM的提取。
【材料和试剂】
(1)DE52纤维素。
(2)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(3)1.5×50cm 层析柱;透析袋及其他透析和层析所需的试剂和器材。
(4)梯度洗脱液包括:0.005 mol/L,pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4;.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4。
【操作步骤】
(1)蛋白标本对0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4透析。
(2)DE52装柱,并以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4平衡。
(3)加样,以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4洗脱,紫外监测直至洗脱液280nm OD回到基线。这一步骤可除去血清中其他蛋白。
(4)以350ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4洗脱,这一步骤可用于纯化血清IgG和IgM。
(5)以125ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4梯度洗脱,总量收集250ml;重复步骤(5)。
(6)根据280nm峰值合并蛋白峰,透析浓缩和保存同上。
用过的DE52可用0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl梯度洗脱回收。再用蒸馏水洗至中性,加入0.02%叠氮钠于4℃保存备用。纤维素DE-52英文名:DEAE Cellulose DE-52
性质及用途:预溶胀微粒, 为中等碱性阴离子交换剂,柱层析用于吸附剂,用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清组分和病毒等各种生物高分子。
性状:干燥细结晶或纤维状
基质 高度交联纤维素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附载量 180mg HSA/ml
填料的颗粒大小 50μm
zui大流速 300cm/h
pH范围 3-10,在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性 各种缓冲液及盐,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M盐酸胍,乙醇,异丙醇等
物理稳定性 0.1M中性缓冲液中,120℃30min
保存温度 +4--30℃

订货信息-阴离子交换剂DEAE和QA纤维

目录号         品名       描述                                                  尺寸
4053-010        DE23      纤维状DEAE-纤维素                        100 g
4053-025        DE23      纤维状DEAE-纤维素                         250 g
4055-010        DE32      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                100g
4056-050        DE51      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                500g
4057-050        DE52      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                500g
4057-200        DE52      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                2kg
4058-050        DE53      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                500g
4058-200        DE53      预溶胀细颗粒DEAE-纤维素                2kg
4065-050        QA52      季铵                                                   500g
4065-200        QA52      季铵                                                   2kg

 

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